20:47 2023-03-28
science - citeste alte articole pe aceeasi tema
Comentarii Adauga Comentariu
_ Vizualizarea fluorescentă și evaluarea absorbției de colesterol mediată de NPC1L1 la nivelurile veziculelor endocitare
_ Vizualizarea fluorescentă și evaluarea mediată de NPC1L1 Absorbția colesterolului la nivelul veziculelor endocitare
Absorbția excesivă a colesterolului din lumenul intestinal contribuie la patogenia hipercolesterolemiei, care este un factor de risc bine stabilit pentru boala cardiovasculară aterosclerotică. Absorbția colesterolului intestinal este mediată în primul rând de proteina Niemann-Pick C1-like 1 (NPC1L1), care este responsabilă pentru absorbția de colesterol a aproximativ 70%. Șoarecii cu deficit de NPC1L1 sunt rezistenți la hipercolesterolemia indusă de dietă, ceea ce oferă o strategie convingătoare pentru intervenția bolilor asociate prin inhibarea expresiei sau activității NPC1L1.
Proteina NPC1L1 este exprimată în perie. membrana de frontieră a intestinului subțire. Proteina este extensiv N-glicozilată și este compusă din 1332 de aminoacizi cu 13 segmente transmembranare, ceea ce face dificilă prepararea unui anticorp ideal pentru a-și analiza comportamentul in vivo. Pe baza studiilor care utilizează linii celulare in vitro, se consideră că NPC1L1 mediază absorbția colesterolului prin endocitoză mediată de clatrină. Cu toate acestea, această noțiune are și o provocare nerezolvată. De fapt, veziculele endocitare ale NPC1L1 cu colesterol nu au fost demonstrate în condiții fiziologice, deoarece nu există un instrument fezabil pentru a vizualiza și evalua endocitoza veziculelor NPC1L1 in vivo.
Folosind tehnologia de editare a genelor CRISPR/Cas9, oamenii de știință de la Universitatea de Medicină Navală din China au generat un model de șoarece în care proteina endogenă NPC1L1 a fost etichetată cu proteină verde fluorescentă îmbunătățită (EGFP). Șoarecii NPC1L1-EGFP le-au permis cercetătorilor să vizualizeze și să evalueze fluorescent endocitoza veziculoasă a NPC1L1-cago în timpul absorbției intestinale a colesterolului. Acest studiu a fost publicat online în Life Metabolism.
În acest studiu, s-a constatat că șoarecii homozigoți NPC1L1-EGFP au o homeostazie normală a colesterolului în condițiile dietei „chow” sau bogate în colesterol. Fluorescența proteinei de fuziune NPC1L1-EGFP localizată la marginea periei a vilozității, mai degrabă decât în criptele din duoden, jejun și ileon, dar nu și colon. Modelul este în concordanță cu caracteristicile distribuției endogene NPC1L1 la șoarecii martor. Veziculele pozitive pentru EGFP au fost vizualizate sub membrana marginii periei în decurs de 5 minute și au atins un vârf la 15 minute după gavajul oral de colesterol.
De remarcat, veziculele s-au colocalizat cu markerul endozomal timpuriu EEA1 iar colesterolul liber colorat cu filipin și gavajul de colesterol au declanșat acumularea de vezicule pozitive EEA1 sub membrana marginii periei. Pretratamentul cu ezetimib inhibitor NPC1L1 a inhibat formarea acestor vezicule endocitare induse de colesterol, susținând în continuare faptul că endocitoza veziculoasă este implicată în absorbția colesterolului mediată de NPC1L1.
Acest studiu, pentru prima dată, demonstrează clar colesterolul liber. în veziculele endocitare NPC1L1 în timpul absorbției intestinale a colesterolului în condiția fiziologică. Acesta oferă un instrument fezabil pentru a evalua endocitoza veziculoasă a încărcăturilor NPC1L1, precum și absorbția colesterolului in vivo în condiții fiziopatologice și farmacologice și poate fi utilizat în descoperirea medicamentelor.
În plus, având în vedere că NPC1L1 mediază, de asemenea, absorbția intestinală a sterolilor non-colesterol, cum ar fi fitosterolii și tocoferolul, acest model de șoarece este benefic și pentru acei cercetători din domeniul sitosterolemiei și al deficitului de vitamina E.
Comentarii:
Adauga Comentariu