09:41
Comentarii Adauga Comentariu

_ Variante Cas13 de înaltă fidelitate cu țintire colaterală minimă de ARN

_ Variante Cas13 de înaltă fidelitate cu țintirea colaterală minimă a ARN

Un studiu recent publicat în Nature Biotechnology a dezvăluit dezvoltarea unor variante de înaltă fidelitate Cas13 cu efecte colaterale semnificativ reduse prin mutageneză și a demonstrat fezabilitatea hfCas13 pentru o degradare eficientă a ARN-ului la țintă, aproape deloc. daune colaterale în celulele și animalele de mamifere.

Această lucrare a fost efectuată de cercetătorii din Laboratorul Dr. Yang Hui de la Institutul de Neuroscience, Centrul de Excelență în Știința Creierului și Tehnologia Inteligenței din cadrul Academiei Chineze de Științe, Stat Laboratorul cheie de neuroștiință și echipa de cercetare și dezvoltare de la HuiGene Therapeutics Co., Ltd.

Sistemul CRISPR-Cas13 este un instrument extrem de eficient pentru țintirea programabilă a ARN și a fost folosit pentru detectarea acidului nucleic și manipulările ARN în diverse tipuri de celule și organisme. Cu toate acestea, au fost ridicate îngrijorări cu privire la efectele nedirecționate ale Cas13. Studiile structurale anterioare au implicat că, la legarea lui Cas13 la ARN-ul țintă, cele două domenii nucleazei HEPN ar putea forma un situs catalitic pe suprafața proteinei, oferind potențial pentru scindarea promiscuă a ARN-ului trecător în afară de scindarea la țintă a ARN-urilor țintă.

Datorită acestui așa-numit efect colateral, Cas13 ar putea degrada atât ARN-urile țintă, cât și cele non-țintă la întâmplare, făcând astfel dificilă proiectarea experimentelor și interpretarea rezultatelor atunci când se utilizează Cas13.

De aceea, încercările de a diminua sau elimina degradarea promiscuă a ARN-ului prin abordări de inginerie sunt necesare pentru cercetarea de bază și viitoarele aplicații in vivo ale sistemului Cas13.

Cercetătorii au proiectat un sistem de plasmidie reporter dublu fluorescent (EGFP & mCherry) pentru a detecta efectele colaterale ale Cas13 în celulele de mamifere. În acest sistem, pierderea celulelor fluorescente mCherry este interpretată ca o editare reușită la țintă; pierderea celulelor fluorescente EGFP este considerată a reprezenta clivaj în afara țintei. Rezultatele au arătat că fie Cas13a, fie Cas13d ar putea induce efecte colaterale semnificative.

Apoi, cercetătorii au căutat să proiecteze Cas13d (RfxCas13d sau CasRx, Cas13d de la Ruminococcus flavefaciens XPD3002) prin mutageneză și să trimită variantele cu efecte colaterale minime, pe baza pe un nou sistem reporter dublu fluorescent bine conceput, format dintr-o singură plasmidă care conține EGFP, mCherry și ARNg care țintește EGFP, împreună cu fiecare variantă Cas13.

Echipa lui Yang a proiectat și generat o bibliotecă de mutageneză a Cas13d variante și le-a transfectat individual în celule HEK293. Analizând fluorescența reporter folosind citometria în flux, cinci variante (N1V7, N2V7, N2V8, N3V7 și N15V4) au prezentat un procent relativ scăzut de celule EGFP+, dar un procent mare de celule mCherry+, indicând activitate ridicată la țintă cu activitate colaterală redusă.

Varianta N2V8, denumită Cas13d de înaltă fidelitate (hfCas13d) pentru cea mai mare specificitate pentru degradarea ARN, a fost utilizată pentru caracterizarea ulterioară, inclusiv analiza țintelor la nivelul transcriptomului folosind secvențierea ARN. HfCas13d a arătat o reducere marcată a numărului de gene în afara țintă atunci când a vizat mai multe transcrieri endogene, cum ar fi PPIA. Mai mult decât atât, variantele hfCas13 nu au arătat daune colaterale detectabile în liniile celulare, animalele transgenice și celulele somatice, susținând aplicațiile lor in vivo.

Important, Yang și echipa sa au identificat sistemul CRISPR-Cas13X în 2021, cel mai mic ( doar 775 de aminoacizi) instrument de editare a ARN în prezent. În noul lor studiu, cercetătorii au dezvoltat în continuare Cas13X și au obținut varianta hfCas13X care prezintă o specificitate ridicată a degradării ARN-ului la țintă, dar efecte colaterale minime. hfCas13X va arăta un mare potențial de aplicare în domeniul terapiei genice bazată pe editarea ARN.

Această lucrare a fost publicată online în Nature Biotechnology la 11 august 2022. Tong Huawei, Huang Jia, Xiao Qingquan, He Bingbing, Dong Xue și Liu Yuanhua sunt primii autori cu contribuții egale.


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

_ Ralf Rangnick spune că viitorul șef de la Manchester United, Erik ten Hag, ar trebui să-l păstreze pe Cristiano Ronaldo

Faceți cunoștință cu bărbații care plătesc 70.000 de lire sterline pentru o operație chinuitoare de lungire a picioarelor pentru a-i face mai înalți

_ Starul Eels Shaun Lane promite că va câștiga funcția de premier pentru Kurt Drysdale, partenerul apropiat care și-a fracturat coloana vertebrală

_ Dylan Brown promite să vâneze mai mult mingea în marea finală a LNR, în timp ce Eels luptă să-l țină la club

_ Câștigătorul finalei NRL a fost decis de MEERKATS în timp ce jucătorii dezvăluie ritualuri ciudate înainte de joc

_ Fiica lui Victoria Beckham, Harper, arată șic în timp ce pozează cu supermodelele Gigi și Bella Hadid

_ Lil' Kim și Remy Ma conduc vedetele la BET Hip Hop Awards

_ Ministrul Culturii: Muzica ne însoţeşte în cele mai importante momente ale vieţii

_ Max Verstappen ar putea PIERDE primul său campionat mondial în timp ce se află în pragul câștigării celui de-al doilea

_ Amenințarea lui Putin: Washingtonul nu a depistat acțiuni ruse de pregătire a armelor nucleare

_ Volodimir Zelenski, favorit pentru Premiul Nobel pentru Pace

_ Lewis Hamilton ar putea fi încoronat campion mondial pentru sezonul trecut, dacă Red Bull va fi găsit vinovat

_ TREBUIE VEZITĂ VIDEO: �Poate că Dumnezeu mă bate pe umăr spun�nd: �Pentru asta te-am eliberat.� � Kari Lake, susținută de Trump, �și spune povestea curajoasă și inspirată

_ Iniţiativă comună a operatorilor de transport gazelor în România, Bulgaria, Ungaria şi Slovacia

_ Uraganul Ian a transformat o insulă paradisică relaxată într-un oraș fantomă presărat cu moloz=

_ Tendința TikTok vede fetele din fostele școli private împărtășesc politici uniforme

_ Versurile şi melodia unei piese trebuie potrivite cu starea de spirit a persoanei în terapie

_ Imagini spectaculoase cu Catedrala Națională: Cum a ajuns să arate la 15 ani de la debutul lucrărilor - FOTO

_ Soții Beckham s-au radiat pentru reunirea lor publică de familie. Deci acesta este CHIAR sfârșitul rupturii?

_ Un fost aliat al lui Vladimir Putin a fost găsit mort în circumstanţe misterioase

_ Cere ca șeful RFL Ralph Rimmer să demisioneze după comentarii șocante despre echipa din Fiji înainte de Cupa Mondială

_ Arizona are un democrat susținut de SOROS care candidează pentru procurorul districtual �n comitatul Maricopa

_ Directorul centralei nucleare de la Zaporojie a fost arestat de către ruși

_ Pericole în parcurile pentru copii. ANPC a propus, în urma unui control, închiderea locurilor de joacă din şase parcuri bucureştene

_ Kevin Garnett cere ca Jayson Tatum și Jaylen Brown de la Celtics să-și intensifice pe fondul scandalului Ime Udoka

_ �Cei care beneficiază sunt cei care au făcut-o� � Vladimir Putin numește șefii suspecți �n atacurile la conductele Nord Stream

_ LAFC a furat titlurile pentru semnarea lui Bale și Chiellini, dar își construiesc succesul de ceva timp

_ Olivia Wilde se bucură de soare în timpul antrenamentului din LA... după ce Don't Worry Darling triumfă la box office

_ Hull îl concediază pe managerul Arveladze cu câteva ore înainte de înfrângerea lui Luton

_ �Democrații din st�nga radicală sunt scăpați de sub control, iar țara noastră se duce �n iad!� � Președintele Trump despre nebunii liberali care distrug America

_ Soprana Felicia Filip: Muzica poate modela lumea; înseamnă echilibru, pace, iubire

_ Căsătorită la First Sight, Gemma Rose din Marea Britanie o reproșează pe Whitney Hughes pentru că și-a furat soțul Matt Murray

_ EDEN CONFIDENTIAL: Harry si Meghan renunta la echipa ei sclipitoare de PR pentru a merge singuri

_ Student „îngrijit”, 18 ani, a murit din cauza unei supradoze de pastile în cameră

_ Prognoză ANM pentru Bucureşti: Temperaturi de până la 27 de grade, dar şi ploi cu fulgere

_ Fostul prezentator al BBC, Mark Mardell, în vârstă de 65 de ani, dezvăluie că are Parkinson

_ Negocierile dintre SUA şi Ucraina privind livrarea de avioane F-16 şi sisteme Patriot continuă, dar în linişte

_ Steven Gerrard numește statutul de transfer al lui Douglas Luiz pe fondul interesului de la Arsenal o „situație delicată”

_ Președintele Senatului, anunț major: România a devenit complet independentă de gazele rusești

_ Regina pop Kylie Minogue îi încântă pe fani cu o postare cochetă pe rețelele de socializare și tachinează noul album KM16

_ Dua Lipa arată simțul stilului pentru o ieșire cu prietenii... la două zile după întâlnirea cu Trevor Noah

_ Directorul general al centralei nucleare Zaporojie, reţinut de o patrulă rusă, anunţă Energoatom

_ Baschet feminin: Selecţionata Statelor Unite, campioană mondială pentru a patra oară consecutiv

_ Oficial din Ministerul Sportului, la finalul Săptămânii Europene a Sportului în România: Rezultatele sunt peste aşteptări

_ Înregistrări cu soldații ruși, care își sună familiile: Suntem încercuiți! Am sunat să-mi iau rămas bun

_ Un test nuclear al Phenianului ar primi un răspuns, anunţă oficiali din armata americană

_ „Tu jefuiești, împușcăm” - Guvernatorul Floridei Ron DeSantis emite un avertisment dur

_ Zelenski îi mulţumeşte lui Biden pentru ajutorul financiar suplimentar: „Este un act real de solidaritate”

_ Kylie Jenner prezintă un display FOARTE busti pentru show-ul Coperni din timpul Săptămânii Modei de la Paris

_ Ascultătorii lui Steve Wright promit să boicoteze BBC după ce gazdele veterane au prezentat ultima dată când vedetele aduc un omagiu

_ Lauren Jackson se retrage cu bronzul la Cupa Mondială după ce Opals a învins Canada... dar ar fi trebuit să fie aur?

_ Confruntarea dintre London Irish și Bath aduce prima bătălie tardivă a fraților Joseph din rugby

_ Un mort şi mai mulţi răniţi după producerea unui seism cu magnitudinea 6 în Sumatra

_ Supraviețuitoarea violului Jeni Haynes anunță o relație la trei ani după condamnarea lui Richard John Haynes

_ Burnley a făcut un start promițător sub Vincent Kompany după retrogradarea în Premier League

_ Iranul anunţă arestarea mai multor străini care ar avea legătură cu protestele

_ Abuzurile continuă în Iran. O femeie care a mâncat în public la restaurant fără hijab, arestată

_ Sărbătorile zilei de 1 octombrie

_ Britanicii susţin că trupele ruse din Ucraina duc lipsă de pansamente şi alte produse medicale

_ VIDEO Principesa Margareta, la conferința dedicată vârstnicilor: 'Societatea are nevoie să înțeleagă valoarea și nevoile oamenilor ajunși la o vârstă înaintată'


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17 Pag.18 Pag.19 Pag.20 Pag.21 Pag.22 Pag.23
Pag.24 Pag.25 Pag.26 Pag.27 Pag.28 Pag.29

Nr. de articole la aceasta sectiune: 1734, afisate in 29 pagini.



ieri 10:08