13:39 2024-04-16 science - citeste alte articole pe aceeasi tema
Comentarii Adauga Comentariu

_ Nouă strategie de spectrometrie de masă cu fotodisociere ultravioletă rezolvată în timp pentru analiza stabilității proteinei țintă

_ Noua fotodisociere ultravioletă rezolvată în timp Strategia de spectrometrie de masă pentru analiza stabilității proteinei țintă

Modul în care mutațiile afectează stabilitatea proteinelor și dinamica structurii este crucial pentru înțelegerea mecanismului molecular al bolii și a designului medicamentului vizat. Cu toate acestea, sondarea detaliilor moleculare ale dinamicii structurii subtile induse de mutații este încă o provocare.

Un grup de cercetare condus de prof. Wang Fangjun de la Institutul Dalian de Fizică Chimică (DICP) al Academiei Chineze de Științe a a dezvoltat o strategie de spectrometrie de masă nativă cu rezoluție în timp (TR-nMS) cuplată cu analiza de fotodisociere ultravioletă (UVPD). Această strategie poate interoga modificările subtile induse de mutație în stabilitatea proteinelor și dinamica de desfășurare a structurii. Studiul este publicat în Journal of the American Chemical Society.

Cercetătorii au inițiat procesul de desfășurare a proteinelor amestecând proteina online cu acid formic. Cu spectrometrie de masă nativă (nMS) și ionizare cu electrospray nedenaturant (nESI), au monitorizat speciile și intensitățile relative ale intermediarilor de desfășurare a proteinei inițiate de acid prin distribuțiile unice de stare de încărcare (CSD) și au caracterizat cantitativ mutațiile M42T/H114R. a indus modificări ale stabilității proteinelor țintă.

În plus, cercetătorii au folosit UVPD și metode de spectrometrie de masă cu ion fragment pentru a compara cantitativ structura dinamică și detaliile moleculare ale intermediarilor de desfășurare ai dihidrofolat reductazei de tip sălbatic (DHFR) și mutantul.

Analiza UVPD a relevat efectul special de stabilizare al cofactorului nicotinamidă adenin dinucleotide fosfat (NADPH) asupra structurii DHFR și că mutațiile M42T/H114R ar putea reduce interacțiunile necovalente NADPH-DHFR, inclusiv reziduurile I41, Q65, V78, D79, I82 și R98, promovând astfel o scădere a stabilității.

„Această lucrare oferă o nouă tehnică pentru studierea dinamicii structurii subtile induse de mutații și a mecanismelor patologice”, a spus prof. Wang.

(Fluierul)

Inapoi