23:59
Comentarii Adauga Comentariu

Modul în care editarea ARN afectează sistemul imunitar

Context

Virusuri ARN dublu-catenar ( virusurile dsARN ) sunt un polyphyletic grup de virusuri care au genomuri dublu spiralate, realizate din acid ribonucleic . Genomul cu catenă dublă este utilizat pentru a transcrie un ARN cu catenă pozitivă de către ARN polimeraza virală dependentă de ARN (RdRp). ARN-ul catenar pozitiv poate fi utilizat ca ARN mesager (ARNm) care poate fi tradus în proteine ​​virale de către ribozomii celulei gazdă . ARN-ul cu catenă pozitivă poate fi, de asemenea, reprodus de RdRp pentru a crea un nou genom viral cu catenă dublă.

Virușii cu ARN dublu catenar sunt clasificați în două filuri separate Duplornaviricota și Pisuviricota (în mod specific clasa Duplopiviricetes ), care se află în regatul Orthornavirae și regatul Riboviria . Cele două grupuri nu împărtășesc un strămoș comun al virusului dsARN. Virușii cu ARN dublu catenar au evoluat de două ori separat de virușii ARN cu catenă pozitivă . În sistemul de clasificare Baltimore , virusurile dsRNA aparțin grupei III.

Membrii grupului de virusuri variază foarte mult în domeniul gazdei ( animale , plante , ciuperci și bacterii ), numărul segmentului genomului (de la unu la doisprezece) și organizarea virionului ( numărul T , straturile de capsidă sau turelele). Virușii cu ARN dublu catenar includ rotavirusurile , cunoscute la nivel mondial ca fiind o cauză comună a gastroenteritei la copiii mici, și virusul febrei catarale ovine , un agent patogen semnificativ din punct de vedere economic al bovinelor și ovinelor. Familia Reoviridae este cea mai mare și diversă familie de virus dsRNA din punct de vedere al gamei de gazde.

Introducere

1. Sistemul nostru imunitar înnăscut a evoluat pentru a recunoaște în mod specific tiparele moleculare comune formate ca urmare a replicării virusului. Aceste modele moleculare - denumite în mod obișnuit modele moleculare asociate cu agenții patogeni sau PAMP - sunt detectate de receptori specializați, numiți receptori de recunoaștere a modelelor (PRR), care pot declanșa rapid sistemul imunitar după recunoașterea ligandului.

2. Replicarea practic a tuturor virușilor ARN și chiar a virușilor ADNs generează intermediari ARN dublu catenar (ds) lungi, perfect împerecheați în citoplasmă. Deoarece aceste dsARN-uri sunt neobișnuite în citoplasma celulelor eucariote, sistemele senzoriale au evoluat pentru a detecta acest PAMP. Aceste sisteme semnalează apoi prezența unui virus invadator, permițând celulei să ia măsurile adecvate.1 , 2 ) (RIG-I).

3. Ulterior, o altă proteină înrudită, gena asociată diferențierii melanomului 5 (MDA5), s-a dovedit a fi implicată și în detectarea dsRNA ( 3 ). Semnalizarea RLR are ca rezultat producerea interferonilor antivirali de tip I (IFN) după PRR oligomerizați de-a lungul filamentelor dsRNA.

4. Aceste PRR oligimerizate recrutează semnalizarea activării mitocondriale a proteinei schelei (MAVS) și kinazelor legate de IKK și acest lucru duce în cele din urmă la fosforilarea factorilor de transcripție a factorului de reglementare interferon 3 și 7 (IRF3 și IRF7) ( 4 , 5 ).

5. Acești factori de transcripție se mută apoi în nucleu unde activează promotorii IFN de tip I conducând la secreția IFN ( 6).

6. Apoi, semnalizarea receptorului IFN duce la inducerea unei stări antivirale în celulele producătoare și vecine prin reglarea în sus a genelor stimulate de interferon (ISG), care codifică proteine ​​cu funcții efective antivirale directe, cum ar fi protein kinaza R (PKR), 2 ′ -5'-oligoadenilat sintetaza 1 (OAS1) și ARNAse L.

7. În timp ce activarea PRR și producția de IFN sunt strict controlate pentru a preveni declanșarea falsă a sistemului imunitar, devine clar că anumiți ARN endogeni pot forma dsRNA. Aceasta include ARN-urile transcrise din retrotranspoziții, cum ar fi repetările Alu, și ARN-urile provenite din matricea mitocondrială ( 7 ).

8. Deși acești ARN au structura corectă pentru a activa PRR-urile, par să nu o facă în circumstanțe normale, deoarece acest lucru ar duce la boli autoimune severe ( 8 ).

9. Acest lucru ridică întrebarea cu privire la modul în care celulele disting între acizii nucleici auto și non-auto.

10. Un proces care poate fi implicat în discriminarea dintre acizii nucleici auto și non-auto este editarea ARN-urilor. Editarea ARN este un proces care reglementează și extinde diversele funcții ale transcrierilor ARN, iar până acum au fost caracterizate mai multe tipuri de editare.

11. La mamifere, există două forme de editare a ARN-ului, dezaminarea citozinelor la uracili de către membrii familiei de proteine ​​a subunității catalitice a enzimei de editare a ARNm apolipoproteinei B (APOBEC) și dezaminarea adenozinelor la inozine (editarea A-la-I) de către adenozin deaminază care acționează asupra genei ARN (ADAR). Mașinile de traducere și îmbinare a celulei interpretează inozinele ca guanozine, în loc de adenozinele codificate în genom ( 9 ). Acest lucru poate duce la substituții non-sinonime dacă editarea are loc în secvențe de codare ( 10). Mai important, substituțiile A-la-I au capacitatea de a destabiliza structurile dsRNA formate între fire complementare datorită înlocuirii perechilor de baze Watson – Crick AU cu perechi de oscilații IU, care sunt izomorfe cu perechi de baze GU ( 11 ).

12. Dovezile sugerează că imunitatea antivirală citoplasmatică este controlată la nivelul recunoașterii dsRNA prin editarea ARN, care pare să joace un rol esențial în menținerea autotoleranței și prevenirea autoimunității.

13. Intrigatoarele, mutații în adenozinei dezaminază ADAR1 poate conferi autoimunitate la oameni și la șoareci ( 12 - 17 ) și recent ADAR1 a fost demonstrat de a reglementa RLR- canonic, PKR- si cai OAS-L cu RNază.

14. Această revizuire rezumă progresele recente legate de funcția ADAR1 ca „regulator principal” al imunității înnăscute citoplasmatice și discută despre modul în care gazda poate monta un răspuns antiviral eficient în prezența ADAR1.

ADAR1: Editor ARN indus de IFN

Editarea A-to-I a fost descoperită inițial ca activitate enzimatică de desfacere a ARNd în Xenopus laevis ( 18 , 19 ). Proteina responsabilă de această activitate, cunoscută acum sub numele de ADAR1, a fost denumită ARN unwindase și, la scurt timp după aceea, s-a constatat că deține și activitate de editare A-to-I ( 20 - 24 ). În plus, au fost descoperite alte două ADAR, cuprinzând astfel o familie de gene de trei membri în genomii de mamifere ( 10 , 25 - 28 ). Două codifică enzimele exprimate omniprezent cu activitate de adenozin deaminază, ADAR1 inductibil IFN și ADAR2 exprimat constitutiv ( 24 , 29 , 30). Al treilea, ADAR3, nu s-a dovedit a avea activitate enzimatică și este exprimat în principal în creier ( 30 - 32 ). Proteinele ADAR prezintă o asemănare arhitecturală extinsă, cu trei copii repetate localizate ale unui domeniu de legare a dsRNA (dsRBD) și un singur domeniu deaminază la capătul C-terminal ( Figura 1 ). Prezența acestor dsRBD subliniază că activitatea ADAR este direcționată către dsRNA.

FIGURA 1 www.frontiersin.org Figura 1 . Arhitectura de domeniu a isoformelor ADAR1 p150 și p110. NES, semnal de export nuclear; dsRBD, domeniu de legare a ARN bicatenar; NLS, semnal de localizare nucleară.

ADAR1 este exprimat la niveluri mai ridicate decât celelalte ADAR-uri și este responsabil pentru majoritatea activității de editare ( 30 ). Proteina codificată de această genă există în două forme care sunt generate din structurile alternative ale exonului 1 care se inițiază de la promotori diferiți ( 33 ). O izoformă mică (p110) este exprimată constitutiv în timp ce o izoformă mai mare (p150) este reglată în sus ca răspuns la IFN. Izoforma p110 este o versiune trunchiată a p150, lipsită de un domeniu de legare a ADN-ului Z la capătul N-terminal, care conține un semnal de export nuclear (NES) ( 33 , 34 ) ( Figura 1 ). Prin urmare, p110 se găsește aproape exclusiv în nucleu, în timp ce p150 este exprimat în mare măsură în citoplasmă ( 35 - 38). Un semnal de localizare nucleară bimodal (NLS) care înconjoară al treilea dsRBD mediază importul nuclear prin transportin-1 ( 39 ).

ADAR1 blochează semnalizarea receptorului RIG-I-Like

Promotorul responsabil pentru expresia p150 posedă un element de răspuns stimulat de interferon (ISRE), caracteristic ISG-urilor ( 33 , 35 , 40 ). Descoperirea acestui element a promis un rol important pentru ADAR1 în răspunsul imun la scurt timp după descoperirea proteinei. Importanța ADAR1 pentru supraviețuire a fost deja recunoscută încă de la început, deoarece șoarecii Adar1 - / - mor în ziua embrionară 11.5-14 cu apoptoză răspândită și moarte celulară a celulelor hemotopoietice hepatice ( 41 - 43 ). Indiciile despre mecanismul care stau la baza acestei letalități, însă, ar putea fi înțelese numai după descoperirea semnalizării RLR. În 2009, Hartner și colegii săi au constatat că mortalitatea în Adar- / - Modelul șoarecilor embrionari a fost asociat cu supraexprimarea IFN ( 44 ), iar trei studii din 2014-2015 au arătat că letalitatea poate fi salvată la nașterea vie ștergând fie Mavs, fie Mda5 ( 13 , 15 , 16 ). În schimb, ștergerea Rig-I nu a salvat letalitatea și răspunsurile inflamatorii ale embrionilor Adar - / - ( 16). Aceste descoperiri au indicat faptul că la șoareci ADAR1 este capabil să blocheze semnalizarea prin axa MDA5-MAVS a căii de semnalizare IFN de tip I și că MDA5 este stimulat de dsRNA endogen în absența ADAR1. Knock-in o formă deficitară de editare a ADAR1 nu a salvat letalitatea, indicând faptul că activitatea enzimatică este crucială pentru supraviețuire ( 15 ). În timp ce ștergerea Rig-I la șoareci nu a salvat letalitatea embrionară, mai multe studii in vitro la șoareci și celule umane au sugerat că activarea RIG-I este, de asemenea, blocată de ADAR1 ( 45 - 47 ). În special, Yang și colab. ( 45) a descris că efectul inhibitor al ADAR1 asupra RIG-I a fost mediat prin legarea ARN mai degrabă decât prin activitatea de editare. Diferențele în tipurile de celule, inclusiv celulele HEK-293T, celulele embrionare murine, macrofagele și hepatocitele pot explica această discrepanță, deoarece este probabil că implicarea ADAR1 în semnalizarea RLR depinde de tipul celulei.

Descoperirile discutate indică faptul că amortizarea semnalizării RLR este crucială pentru homeostazia normală și că speciile de ARN endogene pot declanșa RLR în absența ADAR1. În acord cu modelul embrionar Adar - / - șoarece, mutații naturale în ADAR1 au fost găsite la om cu o interferonopatie severă și rară de tip I, denumită sindromul Aicardi Goutieres (AGS) ( 12 , 14 ). AGS este o encefalopatie fatală a copilăriei, caracterizată prin exprimarea necontrolată a IFN și prezența IFN în lichidul coloanei vertebrale cerebrale, dând naștere simptomelor care amintesc de o infecție virală ( 48 - 51 ). Mutații în MDA5 au fost de asemenea găsite la pacienții cu AGS ( 52 , 53). S-a demonstrat recent că aceste mutații sporesc activitatea MDA5 prin creșterea eficienței sale în recunoașterea dsRNA ( 54 ). O întrebare cheie a apărut din această lucrare: „Ce ligand endogen este recunoscut de RLR-uri care declanșează activarea lor în absența ADAR1 și a replicării virale?”

Odată cu dezvoltarea secvențierii profunde, această întrebare ar putea fi abordată, de exemplu, prin screening-ul pentru editarea site-urilor la nivel global. Astfel de eforturi au arătat că elementele genetice mobile denumite elemente repetitive Alu, care pot forma structuri dsRNA atunci când sunt transcrise ca repetări Alu inversate, sunt cele mai frecvente ținte ale editării A-to-I. În special, repetările Alu sunt numeroase: există mai mult de 1 milion dintre aceste repetări prezente în genomul uman, reprezentând aproape 11% din dimensiunea sa ( 55 ). Repetările alu sunt susceptibile de a fi editate selectiv datorită structurii și dimensiunii lor secundare, deoarece editarea ADAR1 nu necesită o secvență strictă de consens [revizuită de: ( 56 )]. Editarea A-to-I în repetările Alu dispare în ADAR1celule knockout (KO), oferind eventual un substrat dsRNA imunostimulator neditat pentru semnalizarea RLR ( 54 , 57 - 71 ). Cele mai multe dintre aceste repetări Alu sunt prezente în introni și regiuni 3 ’netraduse (UTR) ale ARNm și sunt transcrise de polimeraza-II ( 54 , 71 ). Șoarecii nu posedă repetări Alu specifice primatelor, dar este de conceput că alte elemente genetice mobile capabile să formeze ARNds, cum ar fi rozătoarele înrudite B1-SINE, ar putea stimula MDA5 în moduri similare dacă nu sunt editate. Substraturi suplimentare pentru editarea ADAR1 pot fi dsRNA mitocondriale (mtdsRNA), deoarece s-a demonstrat recent că pacienții cu mutații bialelelice hipomorfe în PNPT1gena, care codifică polinucleotid fosforilază PNPaza, conține ARN mtds în citoplasmă care pot activa MDA5 și induce IFN ( 7 ). Secvențierea în profunzime a celulelor epuizate de PNPază a arătat că ARN-urile mitocondriale au fost editate de la A la I. Epuizarea concomitentă a PNPazei și ADAR1 a îmbunătățit expresia IFN, sugerând că editarea ADAR1 a acestor ARN-uri endogene blochează activarea IFN. Editarea ADNr-urilor gazdă le-ar putea diferenția de ARN-urile virale modificându-le structura secundară pentru a abroga formarea de duplexuri dsARN extinse, prevenind activarea IFN în celulele neinfectate ( 72 ). Alternativ, dsARN modificat ar putea acționa ca un inhibitor activ al semnalizării IFN. Vitali și colab. ( 73) a constatat că dsARN modificat pe scară largă (IU-dsRNA) inhibă activarea căii IFN indusă de imitarea dsARN-ului polirribinozinic: acid polirocitidilic (poli (I: C)) in vitro . Ca mecanism, autorii au propus că IU-dsRNA s-ar putea lega de RLR-uri cu afinitate mai mare decât poli (I: C), prevenind astfel activarea lor. Cartarea site-urilor de editare A-to-I a arătat că editarea poate fi foarte concentrată, oferind o sursă de IU-dsRNA potențial inhibitor IFN in vivo ( 15 ). Aceste date ar putea indica faptul că ADAR1 este necesar pentru a furniza celulei un ligand care inhibă activ semnalizarea IFN (și, eventual, alte răspunsuri antivirale citoplasmatice), o ipoteză care merită o investigație continuă.

ADAR1 blochează arestarea traducerii indusă de PKR

O proteină care este similară cu ADAR1 în ceea ce privește inducerea sa de IFN și prezența mai multor dsRBD, este proteina kinază cu ARN activat dublu catenar (PKR). PKR este unul dintre cele mai bine studiate ISG-uri și expresia sa inhibă replicarea unei game largi de viruși ( 74 ). De asemenea, este antagonizat de mai mulți viruși, inclusiv virusul gripal A, virusul vaccinia și virusul Ebola. Este un membru al familiei de proteine ​​kinaze eIF2α care include, de asemenea, reticul kinaza endoplasmatică asemănătoare PKR (PERK), 2 kinaza de control general ned depresibilă (GCN2) și inhibitorul de traducere reglementat de hemină (HRI). Fiecare dintre aceste kinaze este activată în condiții diferite de stres celular, care este dsARN citoplasmatic în cazul PKR. Recunoașterea substratului conduce la dimerizare prin intermediul dsRBD-urilor sale (75 , 76 ), autofosforilarea și fosforilarea ulterioară a eIF2α ( 77 , 78 ), care oprește traducerea ARNm dependentă de capacul 5 ′ pentru a preveni sinteza proteinelor virale ( 79 , 80 ). Aceasta este însoțită de formarea de granule de stres citoplasmatic (SG), agregări dense de ARN și proteine ​​care stochează complexe de pre-inițiere a traducerii blocate.

Pe lângă funcția sa de amortizare a inducției IFN, ADAR1 este, de asemenea, cunoscut pentru a bloca oprirea traducerii și formarea granulelor de stres prin inhibarea activării PKR ( 81 - 86 ). Mai multe studii au arătat că ADAR1 funcționează într-un mod proviral prin editarea ARN și inhibarea PKR. Exemplele includ virusul rujeolic (MV) ( 83 ), virusul stomatitei veziculare (VSV) ( 81 , 85 ) și virusul imunodeficienței umane (HIV) ( 82 , 87 , 88). În aceste cazuri, ADAR1 este capabil să blocheze PKR și s-a constatat că această inhibiție are loc atât prin mecanisme dependente de editare, cât și prin mecanisme independente. Pentru MV, s-a demonstrat că deficitul ADAR1 duce la citotoxicitate crescută și apoptoză la infecția cu virus, în timp ce replicarea virală a scăzut ( 83 ). Mai mult, activarea PKR observată în celulele ADAR1 knockdown (KD) la infecția cu MV nu a fost salvată de o formă deficitară de editare de p150, indicând faptul că pentru MV inhibarea PKR este dependentă de editare ( 89 ). În schimb, în ​​timpul infecției cu VSV și HIV, s-a constatat că efectul inhibitor al ADAR1 asupra PKR apare într-un mod independent de editare ( 81 , 82). În cazul HIV, s-a observat o interacțiune crescută între ADAR1 și PKR în timpul infecției, care ar putea reprezenta concurență între ambele proteine ​​pentru același substrat sau ar putea indica faptul că ADAR1 interacționează direct cu PKR pentru a preveni dimerizarea acestuia și autofosforilarea ulterioară. Formarea complexă între ADAR1 și PKR este independentă de ARN și primul dsRBD al ADAR1 este necesar pentru legare ( 81 ). Prin interferența cu activarea PKR, ADAR1 previne fosforilarea eIF2α și formarea SG-urilor și, prin urmare, permite traducerea ARNm virali ( 81 , 83 - 85 ).

Observația că șoarecii Mavs și Adar1 dublu knockout (DKO) mor încă la scurt timp după naștere sugerează că letalitatea șoarecilor Adar1 - / - nu depinde doar de inducția IFN. Suprimarea PKR poate fi necesară și pentru supraviețuire, chiar și în absența infecției virale. Interesant, un studiu recent aruncă mai multă lumină asupra acestui aspect ( 71). În acest studiu, sa demonstrat că ADAR1 KO (fie ADAR1, fie ADAR1 p150) scade nivelurile de proteine, dar nu și de mARN, ale mai multor ISG după tratamentul cu IFN. Acest lucru a fost asociat cu fosforilarea PKR și eIF2α la tratamentul cu IFN în KO, dar nu și în celulele de tip sălbatic (WT). Mai mult, PKR KD în celulele ADAR1 KO a restabilit parțial nivelurile de proteine ​​ISG, indicând faptul că activarea PKR în celulele ADAR1 KO este responsabilă pentru lipsa expresiei proteinei ISG. În mod curios, în celulele ADAR1 KO tratate cu IFN, nivelurile de PKR fosforilate au fost semnificativ reduse prin inhibarea transcripției, sugerând că o specie de ARN endogen, transcrisă ca răspuns la IFN, este responsabilă pentru activarea PKR în aceste celule. În același studiu, sa constatat că> 90% din editarea A-to-I are loc în repetările Alu, sugerând că editarea sau legarea ADAR1 le inhibă activarea PKR. În total, aceste rezultate indică faptul că ADAR1 este necesar pentru menținerea unei traduceri eficiente în timpul răspunsului IFN și că transcrierile endogene de ARN activează PKR în absența ADAR1. Speciile de ARN endogen care activează PKR ar putea fi aceleași ARN-uri care activează MDA5 în absența ADAR1, dar acest lucru rămâne de testat.

Relevanța descoperirilor de Chung și colegii a fost subliniată în continuare prin generarea de celule stem embrionare umane ADAR1 KO (hESC). În timp ce această permutare genetică nu a fost letală pentru aceste hESC, acestea au prezentat producția spontană de IFNβ mediată de MDA5, activarea PKR și apoptoza la diferențiere cu celulele progenitoare neuronale (NPC), indicând faptul că cerințele pentru inhibarea PKR sau MDA5 mediate de ADAR1 depind de celulă tipul sau starea de diferențiere. De asemenea, faptul că NPC-urile sunt mai vulnerabile la efectele deficienței ADAR1 poate indica de ce AGS este asociat cu anomalii neurologice. Aceste rezultate sunt în acord cu un studiu realizat de Yang și colegii săi, în care ADAR1 KO a fost indus la șoareci nou-născuți. La sacrificiu, acești șoareci ADAR1 KO inducibili au prezentat niveluri ridicate de IFN în special în țesuturile neuronale ( 45). Din păcate, niciunul dintre studii nu a arătat dacă efectele observate au fost mediate de PKR sau MDA5.

În acord cu constatarea că SG-urile pot funcționa ca platforme pentru semnalizarea RLR ( 90 ), dovezile montante sugerează că PKR este implicat și în inducerea IFN de tip I ( 91 ). PKR poate fi implicat în activarea NFκB, un factor de transcripție necesar pentru inducerea eficientă a IFN, posibil prin interacțiunea sa cu complexul IKK ( 92 ). Mai mult, sa demonstrat că PKR leagă membrii familiei TRAF, care sunt implicați în semnalizarea MAVS ( 93 ). Mai mult, mai multe studii au arătat că PKR este necesară pentru producția de IFN ca răspuns la poli (I: C) in vitro ( 94 - 97). PKR este, de asemenea, necesar pentru producerea IFN de tip I ca răspuns la un subgrup de viruși, inclusiv virusul encefalomiocarditei, virusul encefalomielitei murine Theiler, MV, virusul West Nile și virusul forestier Semliki, dar nu gripa și virusul Sendai ( 98 - 102 ) . În plus, un studiu recent a arătat că PKR interacționează direct cu MDA5 și este capabil să îmbunătățească producția de IFN mediată de MDA5 ( 103 ). Inducția IFN eficientă a necesitat activitatea catalitică a PKR, dar nu și fosforilarea eIF2α, sugerând că aceste efecte sunt independente de inducerea SG-urilor sau de închidere translațională. Deși ADAR1 este capabil să inhibe activarea PKR, contribuția acestei inhibiții la inducerea IFN de tip I mediată de PKR rămâne de determinat.

ADAR1 Blochează calea OAS-RNAse L

Calea oligoadenilat sintetază inductibilă cu IFN (OAS) -RNaza L este activată la detectarea dsARN. Proteinele OAS (OAS1, OAS2, OAS3) produc 2 ′, 5′-oligoadenilați (2-5A) după recunoașterea dsARN. Acest al doilea mesager activează RNaza L prin legarea cu afinitate mare la forma monomerică inactivă a ARNsei L, determinând dimerizarea acestuia în starea sa enzimatic activă ( 104 ). În această stare, este capabil să scindeze atât ARNs viral, cât și gazdă, predominant după dinucleotide UpU și UpA, lăsând un 5'OH și un 2 ', 3'-fosfat ciclic pe produsele de scindare ( 105 ). Activarea ARNAse L poate duce la oprirea traducerii prin scindarea ARN-ului ribozomal și a ARNm ( 79 , 106 ), autofagie ( 107 , 108) și apoptoza ( 109 - 111 ), prevenind replicarea virală și răspândirea.

Un studiu recent a raportat că fenotipul celular letal al ștergerii ADAR1 în celulele adenocarcinomului pulmonar uman A549 a fost salvat de RNASEL KO. Acest lucru a indicat faptul că calea OAS / RNase L este mecanismul principal care duce la moartea celulară în aceste celule, în absența ADAR1 și chiar în prezența MDA5 și MAVS ( 112). Mai mult, expresia ectopică a RNazei L active, dar nu inactive, în celulele ADAR1 / RNASEL DKO a promovat moartea celulară, care susține rolul central al activării RNazei L în moartea celulară mediată de dsARN în această linie celulară. În plus, acumularea de 2-5A indusă de IFN a reprezentat celule DKO RNASEL-ADAR1 mai mari decât în ​​celulele WT și RNASEL KO, indicând faptul că ADAR1 împiedică activarea OAS. Mai mult decât atât, aceste rezultate sugerează că ADAR1 este regulatorul principal al activării ARNAse L în acest tip de celulă, cel mai probabil prin prevenirea activării OAS. Dacă aceste date ar putea fi extrapolate la alte linii celulare sau chiar întregul organism rămâne de testat, dar moartea celulară mediată de RNase L în absența ADAR1 ar putea contribui potențial la AGS. Mai mult, concluziile din Adar și Mavs / Mda5Șoarecii DKO și în NPC-urile KO ADAR1 sugerează că nu OAS-RNAse L, ci calea de semnalizare RLR duce la moartea celulară în absența ADAR1. Deși în prezent nu este sigur ce căi din aval de semnalizarea RLR mediază letalitatea, aceste date indică faptul că calea OAS-RNAse L este un important mediator al morții celulare.

ADAR1 și viruși

O tendință spre mutațiile A-la-G și U-la-C a fost descrisă pentru o gamă largă de virusuri genetice diverse, sugestive pentru editarea ADAR ( 113 ). Acest lucru ar putea duce la sinteza proteinelor virale disfuncționale și a structurilor ARN. Deși mai multe studii au raportat niveluri ridicate de editare care sugerează un rol mutagen și antiviral pentru ADAR1 ( 113), nu există dovezi ale unui rol important pentru ADAR1 ca parte a răspunsului imun înnăscut împotriva infecțiilor cu virus. În plus, studiile care au observat hipermutația nu au demonstrat încă, de exemplu, folosind KO-uri genetice, că o proteină ADAR specifică este responsabilă de editare și nici nu au demonstrat că editarea în sine duce la scăderea replicării virusului. Mai mult, trebuie remarcat faptul că pentru mulți viruși este posibil să nu fie posibil să se facă distincția între editarea virușilor competenți la replicare și genomii virali cu interferență defectă (DI), care pot fi editați frecvent ( 114 - 116). În timp ce editarea genomilor virali ar putea scădea infectivitatea, editarea genomurilor virale DI poate împiedica activarea sistemului imunitar înnăscut. Inhibarea editării ADAR a fost raportată pentru produsele genetice ale virusului adenovirus și Vaccinia, dar nu se știe încă dacă ARN-urile codificate de acești viruși ADN sunt editate de ADAR. ARN-ul asociat cu adenovirus (VAI) este responsabil pentru inhibarea ADAR1 și, în mod interesant, este, de asemenea, capabil să blocheze atât inducerea PKR, cât și inducerea IFN ( 117 - 119 ). Legarea ARN de către PKR este, în general, un semnal activator, dar legarea de ARN VAI la PKR și ADAR1 se crede că inhibă steril homodimerizarea și activarea ( 119 - 121). Proteina E3L a virusului vaccinia ca ADAR1 conține un domeniu de legare a ADN-ului Z lângă un dsRBD și, de asemenea, blochează inducerea IFN, PKR și ADAR1 ( 95 , 121 , 122 ). În special, inhibarea ADAR1 virală ar putea fi un produs secundar al ecranării sau sechestrării dsARN-urilor din PRR-urile antivirale, cum ar fi PKR, OAS, RIG-I și MDA5.

Efectele de amortizare ale ADAR1 asupra sistemelor antivirale și rolul său proviral în timpul replicării unei game largi de viruși ( 81 - 83 , 85 , 87 , 88 ) sugerează că pot exista și viruși care au evoluat pentru a uzurpa ADAR1 pentru replicarea lor. De acord, un studiu recent a arătat că virusul gripal A NS1 și virusul dengue NS3 pot lega ADAR1 și îmbunătăți funcția de editare, deși editarea genomilor virali nu a fost investigată ( 123). Deoarece aceste proteine ​​sunt, de asemenea, capabile să blocheze inducția IFN, acest lucru ridică întrebarea dacă inhibarea IFN este dependentă de ADAR1. Modularea ADAR1 de către viruși subliniază importanța acestei proteine ​​în imunitatea înnăscută și replicarea virală, deși trebuie remarcat faptul că niciunul dintre aceste produse genetice nu s-a demonstrat că modifică editarea de la A la I prin agonism direct sau antagonism al ADAR1 în timpul infecției .

ADAR1 și Rac

Progresele recente în domeniu indică un rol important pentru ADAR1 în tumorigeneză [revizuit în: ( 124 , 125 )]. În majoritatea tipurilor de tumori, nivelurile de editare a ARN sunt crescute în comparație cu țesuturile normale potrivite, sugerând că editarea poate completa modificările ADN genomice și poate conduce la tumorigeneză ( 70 ). Editarea în regiuni de codificare a anumitor ARNm a fost asociată cu activitatea oncogenă, provocând modificări ale aminoacizilor care modifică proprietățile proteinelor ( 70 , 124 , 126 - 129). De exemplu, în timpul carcinomului cu celule scuamoase esofagiene, progresia modificării inhibitorului antizimic crește 1 mARN, ducând la o schimbare de la serină la glicină care afectează nivelurile poliaminei celulare. În plus, ADAR1 poate edita, de asemenea, microARN-urile (miARN-uri), care ar putea inhiba procesarea acestora sau ar putea duce la reorientare ( 130 - 133 ). De exemplu, miR-200b sa dovedit a fi supraeditat în mai multe tipuri de cancer, ducând la reorientarea către receptorul factorului inhibitor al leucemiei supresor tumoral. Nivelurile de editare ale miR-200b s - au dovedit a fi corelate cu supraviețuirea slabă a pacientului. Într-un alt studiu, s-a constatat că editarea ADAR1 reduce nivelurile let-7 de suprimare a tumoriifamilie de miARN, ducând la auto-reînnoire a celulelor stem leucemice ( 132 ). În afară de efectele directe asupra funcției miARN prin editare, ADAR1 s-a dovedit, de asemenea, că interacționează direct cu Dicer pentru a promova procesarea siARN-urilor și miARN-urilor, încărcarea RISC a miARN-urilor și, în consecință, reducerea la tăcere a ARN-urilor țintă ( 134 ). În special, aceste efecte erau independente de editarea ADAR1. Aceste date indică faptul că pierderea ADAR1 ar putea duce la exprimarea neregulată a multor gene, care altfel sunt reduse la tăcere de miARN. Deși ADAR1 este probabil să contribuie la tumorigeneză prin modificarea expresiei genelor prin editarea mecanismelor dependente și independente, ADAR1 s-a dovedit recent că contribuie la tumorigeneză prin rolul său de regulator al imunității înnăscute.

După cum a fost revizuit pe larg de Parker și colab. ( 135 ), IFN de tip I au efecte antitumorale importante, cum ar fi inducerea apoptozei și atracția celulelor imune infiltrante. Prin urmare, celulele maligne cu răspunsuri IFN disfuncționale au un avantaj selectiv. În plus, se crede că pierderea apărării IFN constituie baza selectivității cancerului a mai multor viruși oncolitici ( 136 ). Trei studii recente au arătat că ștergerea ADAR1 în celulele tumorale poate induce letalitatea ( 137 - 139 ). Eliminarea ADAR1 a făcut, de asemenea, aceste celule mai vulnerabile la imuno-terapie și a depășit rezistența la blocarea punctelor de control, identificând ADAR1 ca o nouă țintă imuno-oncologică ( 138). Interesant este că letalitatea celulelor tumorale ADAR1 KO a fost salvată prin deleția PKR, care este distinctă de fenotipul de letalitate embrionară observat la șoarecii Adar1 - / - care a fost mediată prin calea MDA5 / MAVS ( 13 , 15 , 16 ). Într-un alt studiu, letalitatea celulelor A549 ADAR1 KO a fost mediată prin calea OAS / ARNAse L ( 112). Aceste date indică faptul că căile din aval care mediază letalitatea celulară după ștergerea ADAR1 pot depinde de tipul de celulă, stadiul de dezvoltare și / sau natura malignă a celulelor supuse anchetei. Cu toate acestea, pierderea ADAR1, fie în celule normale, fie maligne, va duce la acumularea de dsRNA endogene neditate, care declanșează senzori citoplasmatici dsRNA. Celulele maligne pot avea niveluri crescute de dsRNA neditate datorită pierderii modificărilor epigenetice supresive în regiunile repetate, instabilității genomice sau leziunilor mitocondriale datorate stresului oxidativ ( 140 - 142), care ar selecta pentru celulele care au activități de editare mai mari. Deși activarea senzorilor imuni înnăscuti citoplasmatici este în mod normal dăunătoare, poate fi benefică în contextul tratamentului cancerului prin inițierea semnalizării IFN în microambientul tumoral. Exploatarea acestui mecanism prin inhibare intratumorală ADAR1 sau terapie cu virus oncolitic folosind viruși care (în mod natural) codifică inhibitori ADAR1 pot fi candidați promițători pentru tratamentul cancerului.

Regulamentul ADAR1

Faptul că ADAR1 inhibă căile antivirale canonice în starea de echilibru ridică întrebarea: „Cum depășește gazda această inhibiție în timpul infecției virale pentru a oferi un răspuns antiviral eficient?” ( Figura 2 ). Deși această întrebare este în prezent în curs de investigare extinsă, mai multe linii de dovezi sugerează că activitatea ADAR1 este strict controlată în celulă. Promotorul responsabil pentru expresia p150 posedă un element de răspuns stimulat de interferon (ISRE), caracteristic ISG-urilor ( 33 , 35 , 40). În starea de echilibru, celulele exprimă în general niveluri scăzute de p110 și p150. Este posibil ca aceste niveluri să nu fie capabile să editeze cantitățile mari de intermediari dsRNA virali generate în timpul replicării, ceea ce ar lăsa substraturile neditate să fie recunoscute de PRR odată ce nivelurile de dsRNA depășesc un anumit prag. Cu toate acestea, deoarece transcrierea este un proces relativ lent, este posibil să existe alte mecanisme de reglementare mai rapide, mai rapide.

FIGURA 2 www.frontiersin.org Figura 2 . Efectul de amortizare al ADAR1 asupra activității imune previne autoimunitatea în starea de echilibru, dar trebuie reglat în timpul infecției virale.

Pe lângă reglarea la nivel transcripțional de către IFN, ADAR1 pare să acționeze ca un dimer și dimerizarea poate contribui la reglarea activității de editare și specificitatea substratului ( 143 , 144 ). Regiunea minimă necesară pentru dimerizarea Drosophila ADAR este N-terminal incluzând și primul dsRBD ( 144 ). Deși regiunea exactă necesară pentru dimerizarea ADAR umană nu este încă cunoscută, dsRBD-urile sunt probabil implicate, deoarece aceste domenii reglează adesea dimerizarea proteinelor ( 78 , 145). Având în vedere că ADAR1 poate fi modificat de SUMO-1 într-o regiune între Z-ADN și primul dsRBD și că această modificare scade activitatea de editare, se presupune că modificarea SUMO împiedică steril dimerizarea sau interferează cu legarea substratului ( 146 ).

O altă modificare post-traducere care afectează funcția ADAR1 este ubiquitinarea. Semnalizarea IFN s-a arătat că promovează ubiquitinarea mediată de Lys-48 și degradarea p110 ( 147). În mod critic, această reglare descendentă s-a dovedit a fi necesară pentru semnalizarea IFN pentru a executa o activitate antivirală eficientă în timpul infecției cu VSV, sugerând că celula trebuie să ocolească efectul inhibitor constant al ADAR1 asupra semnalizării IFN pentru a obține un răspuns antiviral eficient. Deoarece p110 este absent în mare parte din citoplasmă, aceste date ar putea sugera că dsARN-urile endogene neditate recent transcrise, exportate din nucleu în citoplasmă, sunt implicate în montarea unui răspuns IFN robust. Este tentant să speculăm că acești ARN endogeni ajută la stabilizarea complexelor de semnalizare RLR fără a necesita cantități mari de dsARN viral dăunător.

Un alt mecanism prin care ADAR1 ar putea fi modulat în timpul infecției virale este prin reglarea disponibilității unui pirofosfat de inozitol liber (IP6). IP6 poate regla ADAR1, deoarece este un cofactor esențial pentru ADAR2 uman și a fost găsit îngropat în nucleul enzimei enzimei ( 148). În plus, majoritatea reziduurilor de contact IP6 sunt conservate între ADAR-urile umane și ADAT1 de drojdie, un membru al unei familii de enzime de editare adenozinice care acționează asupra ARN-ului de transfer (ARNt) s-a bazat, de asemenea, pe IP6 pentru editarea ARNt. Interesant este faptul că un studiu recent care a folosit un ecran de interferență cu ARN la nivelul genomului uman a identificat un rol esențial pentru pirofosata inozitol în răspunsul IFN de tip I ca activități ale inozitol polifosfat kinazelor, IPPK, PPIP5K1 și PPIP5K2 (care convertesc IP5 în IP6 și 1-IP7) au fost cruciale pentru inducerea interferonului și controlul virusurilor Sendai și gripale A ( 149 ). Rămâne de testat dacă acest lucru este legat de activitatea ADAR1.

În total, aceste date indică faptul că activitatea ADAR1 poate fi controlată rapid prin interacțiuni proteină-proteină, modificări post-translaționale sau disponibilitatea cofactorilor. Modularea activității ADAR1 poate fi de așteptat la începutul infecției pentru a genera un răspuns IFN eficient, dar mai târziu în infecție poate fi necesară o creștere a activității ADAR1 pentru a preveni apoptoza în anumite tipuri de celule. Descoperirea unor mecanisme noi care reglează activitatea ADAR1 va fi extrem de interesantă pentru tratamentul infecțiilor virale, cancerului și bolilor autoimune.

Concluzii finale

Duplexurile dsRNA extinse, perfect potrivite sunt neobișnuite în celulele eucariote și sunt indicative ale replicării virale sau ale expresiei elementelor genetice mobile endogene. Sistemele senzoriale au evoluat pentru a răspunde la ARNd. De exemplu, sistemele de semnalizare RLR, PKR și OAS-RNAse L acționează toate ca senzori și / sau efectori în răspunsul la dsRNA. Rezultatele studiilor din ultimul deceniu indică faptul că aceste căi sunt reglementate de ADAR1 ( Figura 3), care a fost descoperită inițial pentru capacitatea sa de a derula structurile ARNds. Deși mecanismele care stau la baza reglementării ADAR1 a acestor căi sunt în prezent în curs de investigare aprofundată, este probabil că există atât mecanisme dependente de editare, cât și mecanisme independente. Importanța ADAR1 în menținerea homeostaziei este subliniată de fenotipul autoimun sever al pacienților cu AGS, care poate fi recapitulat prin deleția homozigotă a Adar1la șoareci. De acord, progresele recente confirmă faptul că funcția principală a ADAR1 pare să fie aceea de a preveni auto-ARN-urile să declanșeze răspunsuri imune. Este probabil ca majoritatea acestor ARN-uri să fie alcătuite din repetări Alu, deși distincția conceptuală dintre sine și non-sine pare a fi complicată de astfel de elemente genetice mobile. În mod curios, aceste repetări pot fi benefice pentru gazda lor prin accelerarea evoluției gazdei ( 150) și se pare că expresia ADAR1 ne permite să trăim împreună cu aceste elemente egoiste prin blocarea tiparelor moleculare imunostimulatoare intrinseci. Aceste modele moleculare sunt prezente și în viruși, ceea ce necesită o reglementare strictă a editării A-to-I pentru a nu predispune gazda pentru infecții virale. În conformitate, dereglarea ADAR1 poate juca un rol important în patogeneza virală. În plus, aceste modele moleculare pot fi crescute în celulele maligne, ceea ce poate explica de ce aceste celule au activități de editare mai mari. Acest lucru ar putea face celulele maligne susceptibile la moartea celulelor prin inhibarea ADAR1 și ar putea identifica ADAR1 ca o nouă țintă în imuno-oncologie.

Stirea

Modul în care editarea ARN afectează sistemul imunitar

de CU Anschutz Medical Campus

Trei cercetători ai Centrului pentru Cancer din Universitatea Colorado fac parte dintr-o echipă care a publicat recent o lucrare care oferă o nouă perspectivă asupra modului în care sistemul imunitar se leagă de cancer.

Quentin Vicens, Ph.

D.

, Jeffrey Kieft, Ph.

D.

, și Beat Vögeli, Ph.

D.

, sunt autori în lucrare, care analizează modul în care o enzimă numită ADAR1 funcționează în căile asociate cu cancerul.

"Intr-o celula, ADAR1 editeaza ARN nativ - sau auto-ARN - astfel incat celula sa il recunoasca ca fiind al sau.

Este o protectie cheie impotriva tulburarilor autoimune", spune Kieft.

Dar, dacă un virus infectează, ARN-ul viral nu este editat de ADAR1, astfel încât celula poate recunoaște acest lucru și poate reacționa.

Celula știe că are ARN străin și activează răspunsurile imune pentru a combate această infecție.

Pentru lucrarea lor publicată luna trecută în revista Nature Communications , Kieft, Vögeli, Vicens și restul echipei - inclusiv Parker Nichols, student absolvent la programul de biologie structurală și biochimie din cadrul Școlii de Medicină CU care lucrează împreună în Laboratoarele Kieft și Vögeli - au analizat unde ADAR1 se leagă în mod specific de ARN pentru a efectua procesul de editare.

Știau deja un domeniu ADAR1 cunoscut sub numele de Z-alfa se leagă de o formă de ARN numită Z-ARN, dar au descoperit că AD-1 Z-alfa se poate lega și de alte forme de ARN. „Echipa a întrebat:„ Cum sunt toate aceste locații din ARN recunoscute de Z-alfa dacă se presupune că nu formează ARN-Z? ”, Spune Kieft.

„Unul dintre mesajele de acasă este că alte forme de ARN se pot lega de Z-alfa ADAR1 și chiar pot forma parțial Z-ARN. Asta a fost o surpriză, deoarece arată că ARN-ul poate forma această structură specifică Z în locuri pe care nu le-am făcut.

Nu recunosc înainte.

" Echipa propune acum un model pentru modul în care Z-alfa ADAR1 este capabil să se lege de diferite tipuri de ARN. Este o constatare importantă în cercetarea cancerului, datorită rolului ADAR1 în reglarea cancerului .

Un sistem imunitar care funcționează în mod normal poate detecta celulele canceroase ca fiind periculoase și apoi le poate elimina, dar dacă se întâmplă prea multe modificări ADAR1, o celulă ar putea reduce răspunsul imunitar într-un efort de a se proteja.

"Într-o mulțime de tipuri de cancer, există o reglementare ascendentă a ADAR1; face mai mult decât ar trebui", spune Kieft.

„Excesul de ADAR1 conduce probabil la mai multe editări de ARN decât este normal.

Acest lucru va regla greșit lucrurile, afectând anumite regiuni de ARN sau tipuri de ARN. Excesul de editare va arunca răspunsul imun normal, dar probabil are multe alte afecțiuni și în celulă.

Cancerul este o boală în care reglarea genelor s- a stricat, deci dacă o cale de reglementare importantă, cum ar fi editarea de către ADAR, s-a stricat, aceasta poate contribui la cancer.

" Cunoașterea tuturor țintelor ADAR1 într-o celulă este, de asemenea, un pas către terapii mai eficiente, spune Kieft.

Dacă cercetătorii înțeleg căile, ar putea să găsească o modalitate de a întrerupe procesul de editare hiperactivă și de a spori răspunsul imun.

Este o constatare aplicabilă și multor alte boli - spune Vögeli de când a fost publicată lucrarea, cercetătorii au auzit de la alți oameni de știință din țară interesați de ADAR1.

„Am primit o mulțime de feedback pe hârtie”, spune el.

"Există un mare interes în acest domeniu chiar acum, iar alte persoane sunt interesate de modul în care ar putea folosi informațiile noastre structurale".

Vögeli și Vicens organizează acum o întâlnire axată pe funcția ADAR1 și reunesc numere speciale ale revistelor Molecules și International Journal of Molecular Sciences.

Vicens spune că proiectul de cercetare ilustrează, de asemenea, importanța muncii colaborative și a deschiderii către noi direcții.

„Practic am adus un nou proiect și direcție la laboratorul Kieft când m-am alăturat”, spune Vicens.

„Ambele laboratoare au fost deschise să-l susțină intelectual și financiar, iar efortul rezultat al echipei a permis cercetări care altfel nu s-ar fi făcut”.


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

BOMBĂ ActiveNews: "Președintele Klaus Iohannis este membru al Organizației Progresiste 'European Council of Foreign Relations' un Think-Tank fondat de GEORGE SOROS". Fluierul.ro a descoperit că ECFR e condusă de Carl Bildt MEMBRU AL GRUPULUI BILDERBERG

Medic acuză: În fazele inițiale, te faci bine în 24 de ore cu o singură perfuzie. România refuză să cumpere tratamentul. În faze mai grave există tratament cu un înalt grad de eficiență:Tocilizumab. România nu-l cumpără. Opinia Fluierul.ro

Suedia suspendă vaccinarea cu Moderna pentru o perioadă nedeterminată pentru orice persoană sub 31 de ani, după ce pacienții vaccinați au dezvoltat o boală cardiacă paralizantă

Aşa convingi o femeie matură să facă amor cu un bărbat tânăr

VIDEO O candidată la postul de guvernator în statul Nevada își face reclamă trăgând cu pistolul

SUA. Sen. Ron Johnson: „16.766 uciși de vaccin în 10 luni. Cu vaccinul COVID, am avut 16.766 de decese în 10 luni, administrând acest vaccin, Nu are niciun rost să obligăm vaccinarea - cu vaccinul COVID, când am avut 16.766 de decese în 10 luni” (VIDEO)

Coronavirus în România 24 octombrie 2021. COVID-19 a răpus un român la 4 minute în ultimele 24 de ore. Peste 11.000 de cazuri. Bilanț complet

Turneul de tenis Transylvania Open începe luni cu 8 jucătoare din România la start. Lista meciurilor din primul tur

Proprietara companiei de dulciuri Fisherman’s friend a lăsat moștenire 41 de milioane de lire sterline săracilor, dar nimic fiului său

Preşedintele Societăţii Române de Epidemiologie le bate obrazul sasului Iohannis, masonului Câmpeanu și inconștientului Câțu prin lipsa de măsuri și măsurile de-a dreptul criminale pe care le-au luat: „Carantina, obligatorie în București și Ilfov”

6 lucruri de știut despre colorarea părului

O pisică din Rusia a fost "arestată" pentru "serviciile" făcute deținuților

Prima țară din Europa care legalizează cultivarea și consumul de cannabis

Coronavirus în România 24 octombrie 2021. Peste 11.000 cazuri noi și 389 de decese. Bilanț complet COVID-19

Fiica lui Pep Guardiola a fost părăsită de un fotbalist cunoscut

ISLANDA A TRIMIS LA INCHISOARE INCA 5 BANCHERI AFLATI IN FUNCTII DE CONDUCERE. Numarul bancherilor cu functii importante aflati in acest moment in inchisoare in Islanda se ridica la 26. Cenzura totala in media occidentala cu privire la acest subiect.

Coronavirus în România 24 octombrie 2021. Bilanț complet COVID-19

Incidența COVID în Capitală este în scădere pentru a doua zi la rând

Avionul Egyptair prăbuşit: Analiza uneia din cutiile negre arată că s-a pronunţat cuvântul "foc"

Bulgaria, mai rău ca România. Vecinii de la sud de Dunăre reclamă că li s-au prăbușit spitalele

Antivacciniștii mărșăluiesc prin centrul Bucureștiului. Manifestanții flutură steaguri tricolore

SuperLiga contraatacă. FT: Real Madrid, Barcelona și Juventus atacă "monopolul" UEFA și FIFA la Curtea Europenă de Justiție.

Urmașul lui Mussolini, convocat în lotul echipei de fotbal Lazio Roma

FOTO Peste 110 milioane de dolari este suma cu care s-au vândut la licitație mai multe capodopere realizate de Picasso

Președinte: Cea mai mare lovitură de la de la moartea lui Pablo Escobar. Cel mai mare traficat de droguri din Columbia a fost capturat într-o operațiune cu sute de mebrii ai trupelor speciale și 22 de elicoptere

Medicamentele pentru tratamentul pacienților COVID, oferite de Franța, au ajuns în România. Arafat: "Pentru noi este un ajutor extraordinar"

HOROSCOP 24 octombrie 2021. Fenomen rar pe cerul de azi. Cu planurile eșuate, aceste zodii au parte totuși de o zi perfectă

Trei turiști au plecat pe munte în pantaloni scurți și adidași. Au fost recuperați de salvamontiști și jandarmi

COMENTARIU Marius Oprea. Pelerinii și-au cîștigat dreptul la sfinți

Alarmă în școli: Elevii le dau pumni colegilor ca în "Jocul calamarului", serialul coreean de pe Netflix care a cucerit lumea

O nouă extragere la loteria vaccinării: Duminică, 24 octombrie, de la ora 20:50

Curtea Constituțională este cea care a cerut Fixarea Unui Prag al Prejudiciului Adus în cazul Abuzului în Serviciu constatând că în caz contrar s-ar trece direct la răspunderea penală trecând peste răspunderea disciplinară şi administrativă

Azi, ora 20.00, OFF/ON THE RECORD, cu Sorina Matei, pe Aleph News și Mediafax.ro. Invitat Radu Lupescu, medicul român de la Clinica Rhéna din Strasbourg, decorat de președintele Franței pentru managementul pandemiei

Cum a schimbat inflația comportamentului de consum: oamenii merg mai rar la magazin și vizează promoțiile și mărcile private

ZEROHEDGE: De ce Protestul de la Capitoliu a îngrozit elitele

Dănuț Lupu, despre lupta teribilă cu COVID-19: "Am slăbit vreo 26 de kilograme". Fratele său n-a rezistat

BNR schimbă condițiile de creditare. Avansul crește pentru creditele de investiții imobiliare

YouTube Music a ajuns la 50 de milioane de abonați și amenință poziția Spotify

Criză santitară: Niciun pat nu este liber în secțiile ATI COVID din România

VIDEO Incident în Iran. Un guverator a fost pălmuit chiar pe scena unde ținea un discurs. Motivul atacului ar avea legătură cu vaccinarea

Florin Cîțu refuză să fie parte din viitorul Guvern: "PSD și USR m-au dat jos, nu există compatibilitate"

VIDEO. CEO-ul Facebook, Zuckerberg, s-a dat de gol și a spus către angajați că îi e frică de Vaccinurile care modifică ARN-ul și ADN-ul într-o poziția „anti-Vaccin”, în contradicție cu noua politică a propriei platforme

Valeriu Gheorghiță explică cum se poate reduce de 20 de ori numărul deceselor. "Imunitatea de grup va fi mult mai mare"

Proiect: Elevii vor studia obligatoriu educație financiară și educație juridică de anul viitor

Vaccinarea anti-COVID în România. Peste 110.000 de români s-au vaccinat în ultimele 24 de ore

Sfatul unui medic: "Vaccinați-vă, dar stați deoparte! Numărul real de infectări este 100.000 pe zi"

Măsura dură luată de autoritățile chineze în Wuhan, locul din care a izbucnit pandemia

Fete injectate în cluburi de noapte cu somnifere sau cu "droguri de viol"

Autoritățile din București confirmă că școlile private vor fi deschise luni dimineața. Articolul din decizia CNSU nu a fost preluat în Hotărârea de Guvern

Cristina Neagu a purtat-o spre victorie pe CSM București în meciul cu Budućnost Podgorica

Fluierul a avut încă o dată dreptate. După ce ne-a intoxicat la începutul Pandemiei cu originea "sigur, sigur, naturală" a virusului, celebrul The Lancet, o întoarce că la Brăila: "nu există dovezi care să susțină în mod direct o origine naturală"

Un bărbat salvează un ou minuscul abandonat. Ce se întâmplă după, într-un video viral emoționant

Bolșevism UDMR-ist. Penibilul Cseke "își asumă". Cseke: " Îmi asum certificatul verde obligatoriu în Sănătate. Cel care nu prezintă Certificatul va rămâne fără loc de muncă." E nevoie de o LEGE în Parlament, Penibilule, ca să îngrădești drepturile omului

Confuzie pentru elevi: Articolul din decizia CNSU privind suspendarea cursurilor la privat nu e în Hotărârea de Guvern

Vaccinarea prinde viteză. Peste 45.000 de bucureșteni imunizați în ultimele 2 zile

Date Reuters: Europa de Est este acum epicentrul pandemiei de COVID. Rusia, Ucraina și România în vârful bilanțului sumbru

Roxana Nemeş, protagonista unui film XXX: "Eu sunt acolo. Toată lumea face asta"

Accesul în sediile instanțelor și parchetelor nu se face în baza certificatului verde

VEDETE de la noi, în SCENE EROTICE de mult UITATE! CELE mai TARI NUDURI din filmele românești | FOTO & VIDEO

VIDEO Fotbal total în Anglia: Manchester United - Liverpool 0-5. Meci perfect pentru egipteanul Mo Salah


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16

Nr. de articole la aceasta sectiune: 909, afisate in 16 pagini.