09:41
Comentarii Adauga Comentariu

_ Variante Cas13 de înaltă fidelitate cu țintire colaterală minimă de ARN

_ Variante Cas13 de înaltă fidelitate cu țintirea colaterală minimă a ARN

Un studiu recent publicat în Nature Biotechnology a dezvăluit dezvoltarea unor variante de înaltă fidelitate Cas13 cu efecte colaterale semnificativ reduse prin mutageneză și a demonstrat fezabilitatea hfCas13 pentru o degradare eficientă a ARN-ului la țintă, aproape deloc. daune colaterale în celulele și animalele de mamifere.

Această lucrare a fost efectuată de cercetătorii din Laboratorul Dr. Yang Hui de la Institutul de Neuroscience, Centrul de Excelență în Știința Creierului și Tehnologia Inteligenței din cadrul Academiei Chineze de Științe, Stat Laboratorul cheie de neuroștiință și echipa de cercetare și dezvoltare de la HuiGene Therapeutics Co., Ltd.

Sistemul CRISPR-Cas13 este un instrument extrem de eficient pentru țintirea programabilă a ARN și a fost folosit pentru detectarea acidului nucleic și manipulările ARN în diverse tipuri de celule și organisme. Cu toate acestea, au fost ridicate îngrijorări cu privire la efectele nedirecționate ale Cas13. Studiile structurale anterioare au implicat că, la legarea lui Cas13 la ARN-ul țintă, cele două domenii nucleazei HEPN ar putea forma un situs catalitic pe suprafața proteinei, oferind potențial pentru scindarea promiscuă a ARN-ului trecător în afară de scindarea la țintă a ARN-urilor țintă.

Datorită acestui așa-numit efect colateral, Cas13 ar putea degrada atât ARN-urile țintă, cât și cele non-țintă la întâmplare, făcând astfel dificilă proiectarea experimentelor și interpretarea rezultatelor atunci când se utilizează Cas13.

De aceea, încercările de a diminua sau elimina degradarea promiscuă a ARN-ului prin abordări de inginerie sunt necesare pentru cercetarea de bază și viitoarele aplicații in vivo ale sistemului Cas13.

Cercetătorii au proiectat un sistem de plasmidie reporter dublu fluorescent (EGFP & mCherry) pentru a detecta efectele colaterale ale Cas13 în celulele de mamifere. În acest sistem, pierderea celulelor fluorescente mCherry este interpretată ca o editare reușită la țintă; pierderea celulelor fluorescente EGFP este considerată a reprezenta clivaj în afara țintei. Rezultatele au arătat că fie Cas13a, fie Cas13d ar putea induce efecte colaterale semnificative.

Apoi, cercetătorii au căutat să proiecteze Cas13d (RfxCas13d sau CasRx, Cas13d de la Ruminococcus flavefaciens XPD3002) prin mutageneză și să trimită variantele cu efecte colaterale minime, pe baza pe un nou sistem reporter dublu fluorescent bine conceput, format dintr-o singură plasmidă care conține EGFP, mCherry și ARNg care țintește EGFP, împreună cu fiecare variantă Cas13.

Echipa lui Yang a proiectat și generat o bibliotecă de mutageneză a Cas13d variante și le-a transfectat individual în celule HEK293. Analizând fluorescența reporter folosind citometria în flux, cinci variante (N1V7, N2V7, N2V8, N3V7 și N15V4) au prezentat un procent relativ scăzut de celule EGFP+, dar un procent mare de celule mCherry+, indicând activitate ridicată la țintă cu activitate colaterală redusă.

Varianta N2V8, denumită Cas13d de înaltă fidelitate (hfCas13d) pentru cea mai mare specificitate pentru degradarea ARN, a fost utilizată pentru caracterizarea ulterioară, inclusiv analiza țintelor la nivelul transcriptomului folosind secvențierea ARN. HfCas13d a arătat o reducere marcată a numărului de gene în afara țintă atunci când a vizat mai multe transcrieri endogene, cum ar fi PPIA. Mai mult decât atât, variantele hfCas13 nu au arătat daune colaterale detectabile în liniile celulare, animalele transgenice și celulele somatice, susținând aplicațiile lor in vivo.

Important, Yang și echipa sa au identificat sistemul CRISPR-Cas13X în 2021, cel mai mic ( doar 775 de aminoacizi) instrument de editare a ARN în prezent. În noul lor studiu, cercetătorii au dezvoltat în continuare Cas13X și au obținut varianta hfCas13X care prezintă o specificitate ridicată a degradării ARN-ului la țintă, dar efecte colaterale minime. hfCas13X va arăta un mare potențial de aplicare în domeniul terapiei genice bazată pe editarea ARN.

Această lucrare a fost publicată online în Nature Biotechnology la 11 august 2022. Tong Huawei, Huang Jia, Xiao Qingquan, He Bingbing, Dong Xue și Liu Yuanhua sunt primii autori cu contribuții egale.


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

_ Ralf Rangnick spune că viitorul șef de la Manchester United, Erik ten Hag, ar trebui să-l păstreze pe Cristiano Ronaldo

Faceți cunoștință cu bărbații care plătesc 70.000 de lire sterline pentru o operație chinuitoare de lungire a picioarelor pentru a-i face mai înalți

_ Starul Eels Shaun Lane promite că va câștiga funcția de premier pentru Kurt Drysdale, partenerul apropiat care și-a fracturat coloana vertebrală

_ Dylan Brown promite să vâneze mai mult mingea în marea finală a LNR, în timp ce Eels luptă să-l țină la club

_ Câștigătorul finalei NRL a fost decis de MEERKATS în timp ce jucătorii dezvăluie ritualuri ciudate înainte de joc

_ TREBUIE VEZITĂ VIDEO: �Poate că Dumnezeu mă bate pe umăr spun�nd: �Pentru asta te-am eliberat.� � Kari Lake, susținută de Trump, �și spune povestea curajoasă și inspirată

_ LAFC a furat titlurile pentru semnarea lui Bale și Chiellini, dar își construiesc succesul de ceva timp

_ Olivia Wilde se bucură de soare în timpul antrenamentului din LA... după ce Don't Worry Darling triumfă la box office

_ Amenințarea lui Putin: Washingtonul nu a depistat acțiuni ruse de pregătire a armelor nucleare

_ Volodimir Zelenski, favorit pentru Premiul Nobel pentru Pace

_ Hull îl concediază pe managerul Arveladze cu câteva ore înainte de înfrângerea lui Luton

_ Lewis Hamilton ar putea fi încoronat campion mondial pentru sezonul trecut, dacă Red Bull va fi găsit vinovat

_ �Democrații din st�nga radicală sunt scăpați de sub control, iar țara noastră se duce �n iad!� � Președintele Trump despre nebunii liberali care distrug America

_ Fiica lui Victoria Beckham, Harper, arată șic în timp ce pozează cu supermodelele Gigi și Bella Hadid

_ VIDEO Principesa Margareta, la conferința dedicată vârstnicilor: 'Societatea are nevoie să înțeleagă valoarea și nevoile oamenilor ajunși la o vârstă înaintată'

_ Luptele de stradă se extind în Iran: un colonel al Gardienilor Revoluţiei a murit în schimburile de focuri

_ Arizona are un democrat susținut de SOROS care candidează pentru procurorul districtual �n comitatul Maricopa

_ Directorul centralei nucleare de la Zaporojie a fost arestat de către ruși

_ Un tânăr a murit, după ce mașina lui s-a izbit frontal de un TIR

_ Kevin Garnett cere ca Jayson Tatum și Jaylen Brown de la Celtics să-și intensifice pe fondul scandalului Ime Udoka

_ Pericole în parcurile pentru copii. ANPC a propus, în urma unui control, închiderea locurilor de joacă din şase parcuri bucureştene

_ Ion Cristoiu: De ce nu demisionează Volodîmîr Zelenski, deşi sub conducerea sa Ucraina a pierdut o treime din teritoriu

_ Pledoaria fostului căpitan al Eels ca fanii să-l îmbrățișeze pe Jarryd Hayne după distanțarea NRL și a clubului

_ Rick Ponting spune că ușa este deschisă pentru ca Tim Paine să joace BBL în timp ce fostul căpitan de test se întoarce la cricket

_ Caporalul de armată neagă că a bâjbâit sânul unei soldate și că a atins fundul altuia

_ �Nu este vorba despre a da cu piciorul mingii �n autoritate sau orice altceva� � John Fetterman c�nd a fost �ntrebat ce mai face (VIDEO)

_ Reacții adverse la portretizarea „dezgustătoare” a vieții ei din filmul Marilyn Monroe

_ Amanta lui John le Carré dezvăluie că viața lor amoroasă secretă a fost la fel de intrigantă ca și cărțile sale

_ Lupta dintre Errol Spence Jr. și Terence Crawford „este în pericol din cauza unei dispute contractuale”

_ Andrea Bocelli urcă pe scenă alături de fiul lui Matteo, de 24 de ani, și de fiica de 10 ani, Virginia

_ Cere ca șeful RFL Ralph Rimmer să demisioneze după comentarii șocante despre echipa din Fiji înainte de Cupa Mondială

_ Gigi Hadid a rămas fără sutien în timp ce se alătură surorii Bella pe pistă la primul spectacol PFW al Victoria Beckham

_ Ne-am pozat ca un adolescent TikTok... iar postările de sinucidere au apărut în câteva minute

_ Max Verstappen ar putea PIERDE primul său campionat mondial în timp ce se află în pragul câștigării celui de-al doilea

_ Ministrul Culturii: Muzica ne însoţeşte în cele mai importante momente ale vieţii

_ Lil' Kim și Remy Ma conduc vedetele la BET Hip Hop Awards

_ Tendința TikTok vede fetele din fostele școli private împărtășesc politici uniforme

_ Imagini spectaculoase cu Catedrala Națională: Cum a ajuns să arate la 15 ani de la debutul lucrărilor - FOTO

_ Iniţiativă comună a operatorilor de transport gazelor în România, Bulgaria, Ungaria şi Slovacia

_ Uraganul Ian a ajuns în Carolina de Sud - Nou bilanţ: 23 de victime

_ 'Lula has called Bolsonaro "a liar", on the other hand president Bolsonaro has called Lula "a thief"'

_ Soții Beckham s-au radiat pentru reunirea lor publică de familie. Deci acesta este CHIAR sfârșitul rupturii?

_ Britanicii susţin că trupele ruse din Ucraina duc lipsă de pansamente şi alte produse medicale

_ Sărbătorile zilei de 1 octombrie

_ Reese Witherspoon și Julianna Margulies arată șic de afaceri pe platourile de filmare de la The Morning Show din NYC

_ EXCLUSIV/Azi, InSecuritate. Invitat gen. lt. (r) Dumitru Prunariu, de la ora 19.00, pe SMART TV, şi de la ora 22.55, pe Aleph News

_ Senator PNL: 'Tactica pământului pârjolit pe care o aplică PSD la guvernare trebuie să înceteze'

_ Răcirea îmbunătățită a mantalei în timpul înregistrărilor neoproterozoice târzii apariției tectonicii moderne a plăcilor

_ �Cei care beneficiază sunt cei care au făcut-o� � Vladimir Putin numește șefii suspecți �n atacurile la conductele Nord Stream

_ Fiica lui Victoria Beckham, Harper, arată șic în timp ce pozează cu supermodelele Gigi și Bella Hadid

_ Răcirea îmbunătățită a mantalei în timpul înregistrărilor neoproterozoice târzii apariției tectonicii moderne a plăcilor

_ Sarah Murdoch aterizează în Australia după ce a călătorit într-o reclamă cu o geantă de mână de 3400 de dolari

_ Daisy Edgar-Jones arată fără efort șic în timp ce se alătură lui Austin Butler la cina lui Elvis

_ Cinci jucători de fotbal feminin susțin că au auzit strigăte de „Stand up, N-words” de la mulțimea BYU

_ Hugh Jackman, 53 de ani, își arată bicepșii rupti în urma unui antrenament extenuant și transpirat

_ Hull City 0-2 Luton Town: Două goluri în prima repriză au pecetluit trei puncte pentru Hatters

_ Directorii de la Hollywood „au abordat creatorii scenetei „Chad Powers” ​​a lui Eli Manning despre serialul TV”

_ Bărbatul este înjunghiat cu brutalitate pe o stradă din nordul Londrei

_ CONFERINȚA S�MBĂTĂ: �Ascensiunea adevărului, dispariția mașinilor� din Tempe, AZ, cu lista de vorbitori All-Star

_ Kamala Harris sugerează că ajutorul pentru uragan și dezastre ar trebui să se bazeze pe rasă (VIDEO)


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17 Pag.18 Pag.19 Pag.20 Pag.21

Nr. de articole la aceasta sectiune: 1254, afisate in 21 pagini.



ieri 05:59