![]() Comentarii Adauga Comentariu VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.![]() (traducere încă needitată complet) Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussisSatoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016) doi : 10.1038 / srep36943 Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii Primit: 05 mai 2016 Admis: 24 octombrie 2016 Publicat: 11 noiembrie 2016 RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui). Actualizat online 11 mai 2018 AbstractVaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși. În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS). Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor. Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu. Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS. IntroducereExistă o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.
Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].
Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative. De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând. Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene. Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8]. Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente. Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10. Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.
Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC. RezultateAdministrarea vaccinului HPV
Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).
Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii. ![]() Imagine de dimensiune completă Analize patologice
Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).
Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm. ![]() Imagine de dimensiune completă
Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.
Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare
Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.
Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm. ![]() Imagine de dimensiune completă Identificarea celulelor apoptotice
Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.
Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. ![]() Imagine de dimensiune completă Neurotransmisia în regiunile circumventriculare În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse. Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm. ![]() Imagine de dimensiune completă Discuţie În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite. Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate. Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor. În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS. Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece. În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități; Metode aplicate pe Șoareci Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale. Reactivi și anticorpi Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich. Vaccinare Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului. Histologie Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină, Analiza TUNEL Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină. Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin
Linkul direct catre PetitieCitiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:
|
06:17
CITATUL ZILEI
ieri 19:53
Accident grav în Vrancea: 5 mașini implicate
ieri 16:35
VIDEO Donald Trump a părăsit Casa Albă
ieri 06:48
CITATUL ZILEI
|
|
Comentarii:
Adauga Comentariu