23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

BOMBĂ ActiveNews: "Președintele Klaus Iohannis este membru al Organizației Progresiste 'European Council of Foreign Relations' un Think-Tank fondat de GEORGE SOROS". Fluierul.ro a descoperit că ECFR e condusă de Carl Bildt MEMBRU AL GRUPULUI BILDERBERG

DEMISIA. Iohannis: "Mi s-a propus să fiu membru" în organizația condusă de un Bilderberg și finanțată de Soros. "Sunt bucuros să spun că-mi doresc acest lucru"

"SOLUȚIA" LUI SOROS LA CRIZA COVID. Soros vrea ca țările UE să elibereze Titluri de Stat Perpetue pentru ca popoarele UE să plătească VEȘNIC, 5 miliarde de euro dobândă în FIECARE an. Asta l-a dus mintea de speculant pe SOROS.

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Tăriceanu publică documente primite de la MAE: "Prima informare despre virus a fost trimisă la 6 ianuarie. Iohannis și Guvernul Său au știut ce se întâmplă în China și în alte țări, dar au preferat să țină totul sub tăcere"

Putin vrea să introducă în programa școlară ora de "Patriotism". Progresiștii se vor zvârcoli ca nebunii...ca să arate "cât de greșit este sa înveți copiii sa fie patrioți".. N-o să mai poată destrăma Statele Naționale

Daniela Crudu, sex la Burlăciţa. Ce decizie au luat şefii show-ului după apariţia IMAGINILOR XXX

TICĂLOȘII. IATĂ ce fac acești USR-iști, porecliți pe drept cuvânt "Uniunea lui Soros din România". Deputații USR s-au abținut la votul - ce marca Unirea Transilvaniei cu România - la legea privind declararea zilei de 4 iunie Ziua Tratatului de la Trianon

Românii sunt ținuți ÎN MOD INTENȚIONAT cu Salarii de Mizerie pentru a fi o forță de muncă ieftină pentru MULTINAȚIONALELE STRĂINE. Salarii de MIZERIE de 300-450 de euro în toate regiunile țării.

O mireasă VIRGINĂ a fost şocată când a văzut ce are soţul ei în pantaloni. Ce a urmat este INCREDIBIL

Cum s-a trăit în România în anii '70- '80? UNII VĂ MINT spunându-vă că s-a trăit permanent prost între anii 1965 - 1989.

O adolescentă de 17 ani, GOALĂ la prima experienţă la SOLAR. Un angajat a FILMAT TOT cu mobilul

ISTORIA AȘA CUM NU V-O POVESTEȘTE NIMENI. Dezvăluirile lui Ștefan Andrei - Ministrul de Externe al lui Nicolae Ceaușescu - despre rețeaua de Spioni KGB GRU și NKVD ai Moscovei din partidul Comunist Român - Rețea care l-a ucis pe Nicolae Ceaușescu

Roxana Nemeş, protagonista unui film XXX: "Eu sunt acolo. Toată lumea face asta"

SCENE DE SEX la "Mireasă pentru fiul meu"? Ce au văzut telespectatorii, la TV, a creat isterie | VIDEO

Un fost polițist a fost omorât de protestatari în SUA. Incidentul a fost transmis în direct pe Facebook

Noile vaccinuri vor altera în mod permanent ADN-ul uman. Nimeni nu va mai şti exact decât producătorii lor ce anume vor modifica vaccinurile în ADN-ul fiecărei persoane.

Avionul Egyptair prăbuşit: Analiza uneia din cutiile negre arată că s-a pronunţat cuvântul "foc"

Birkenfeld sau Birkenau? După românul MORT la SPARANGHEL, un alt ROMÂN a MURIT la muncă în GERMANIA, de data aceasta în ABATOR. Sparanghela Merkel și Guwernerul Klaus îi au pe conșțiință pe acești morți....lipsiți de cea mai elementară protecție sanitară

Protestele din SUA s-au încheiat fără incidente majore

Proteste violente în Paris. Forțele de ordine au folosit gaze lacrimogene pentru a dispera protestatarii care cereau dreptate pentru Adama Traore

Violeta Alexandru susține o conferință de presă privind măsurile active adoptate de Guvern pentru piața muncii

PROGRESISMUL FACE RAVAGII ÎN SUA: Azi despre Justiția Progresistă din Texas: Procurorii și Poliția Texas au făcut peste 50 de milioane de dolari în 2017 prin confiscarea proprietăților oamenilor

"Sacrificat". Medicul din Wuhan a cărui piele și-a schimbat peste noapte culoarea a murit de coronavirus. Cazul a stârnit revoltă în China

Deputații ALDE s-au afiliat grupului parlamentar al PSD

Peste 61.000 de români CER "Opriți Jaful. Vreau să las moștenire copiilor mei această țară!". NATIONALIZAREA RESURSELOR, OPRIREA CONCESIONĂRILOR PE NIMIC ȘI INTERZICEREA VÂNZĂRII TERENURILOR LA STRĂINI - e cea mai semnată Petiție de pe PetițieOnline.net.

Ce le făcea Maria Tereza bărbaţilor cu care făcea amor. "Trăgea de o manetă şi..."

DEPOPULARAREA ȚĂRII ŞI REPOPULAREA EI CU IMIGRANȚI PLANUL GLOBALIST CARE LOVEŞTE ROMÂNIA. Președintele INS: Pe scenariile pesimiste, populația României va ajunge la 14-15 milioane în 30-40 de ani

CITATUL ZILEI

Continuă progapanda progresistă pentru distrugerea localităților româneşti. Hotnews "Noi de ce n-am putea? Europa îşi comasează localitățile pentru a-și reduce cheltuielile guvernamentale. Noi o luăm pe contrasens"

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Analiza Gramaticala - Clasele V - VIII

CORONAVIRUS. "Salt" uriaș într-un județ care avea până acum extrem de puține cazuri confirmate. Bilanțul rămâne neschimbat în 13 județe din România

Cu trenul, în drum spre mare. CFR anunță că Trenurile Soarelui vor intra în circulație curând

GOSPODAR FĂRĂ PERECHE. Scene XXX între Ion şi Ionela. Fermierul este călărit în faţa camerelor fără nici o jenă VIDEO

EXCLUSIV: Muzeul de locomotive cu abur din Reşiţa va fi vândut pe bucăţi. Primăria a luat act de intenţie

Germania relaxează din 15 iunie restricțiile de circulație impuse statelor din Uniunea Europeană, în timpul pandemiei

Caru' cu vedete:Anda Adam trage de fiare, antrenorul trage cu ochiul la silicoane;Scandal monstru intre Naomi si Adriana Bahmuteanu. A dat-o afara din emisiune;Alina Eremia a pozat pe jumatate dezbracata! Ce sutien sexy a ales artista

FRANȚA. Testele cu vaccinul contra Ebola au fost suspendate după ce unii dintre pacienți au dezvoltat complicații neurologice grave care duc spre paralizie

CCR discută sesizarea referitoare la prelungirea mandatelor aleșilor locali

COMENTARIU Marius Oprea: Statele Dezbinate ale Americii și libertatea - acest moment fragil și neprețuit al istoriei

Coronavirus: Peste 30.000 de morți în total și un record zilnic al numărului de decese

Marea Britanie anunță schimbarea legislației. Ce se va întâmpla cu milioane de locuitori

Un produs industrial românesc, la mare căutare pentru autostrăzi. Mii de tone la tronsonul Sebeș – Turda

Avertisment: Ruda șacalului african, tot mai activă în România. Atacă găinile dar poate mânca și o oaie

Alba: Doi răniți grav într-un accident produs pe DN 1, la Lancrăm; este solicitat un elicopter SMURD

Transfăgărășanul va face parte din traseul de concurs al Raliului Argeșului

JäGERCHOR. Prima măsură de RELAXARE: "Să vină nemții și austriecii să ne ucidă animalele". GuWernerul și LODOVIC LIBER la Vânătoare după 15 mai. Cadru Universitar Veterinar de la Cluj: "majoritatea vânătorilor sunt austrieci și germani. Mai vin și cehi"

Botoșani: Bărbatul rănit grav într-un incendiu a decedat la spital

Mișcări politice în Parlament: Toți deputații ALDE s-au afiliat grupului parlamentar al PSD

Alina Chivulescu, filmată în timp ce face amor. Cine este partenerul FOTO

Românii care pleacă în vacanță pe plajele din Grecia sau Bulgaria ar putea scăpa de cele 14 zile de izolare - surse

EFEMERIDE ASTRONOMICE - 3 iunie

SUA: Pentagonul a deplasat circa 1.600 de soldați în regiunea capitalei federale Washington

Coronavirus în lume LIVE UPDATE 3 iunie: Peste 33.500 de morți în Italia. Numărul persoanelor vindecate se apropie de 3 milioane

O carte pe zi: "Ionesco. Elegii pentru noul rinocer", de Liliana Corobca

Nelu Tătaru confirmă că a fost la ziua premierului Ludovic Orban, dar numai la început

Mandatele primarilor, în aer. Ciolacu aruncă vina la PNL: Din cauza lor, CCR a declarat neconstituționale prevederile

Autoritățile americane sunt îngrijorate de o posibilă creștere a numărului de cazuri de Covid-19 în urma protestelor

CCR: Prelungirea mandatelor autorităților administrației publice locale prin OUG - neconstituțională (surse)


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10

Nr. de articole la aceasta sectiune: 567, afisate in 10 pagini.



ieri 05:37 CITATUL ZILEI